細(xì)胞核作為atcc細(xì)胞的一個(gè)功能單位，完整地保存遺傳物質(zhì)，并指導(dǎo)RNA合成，進(jìn)而表達(dá)出相應(yīng)的蛋白，在一定程度上細(xì)胞核控制著細(xì)胞的代謝、生長(zhǎng)、分化和繁殖活動(dòng)。因此細(xì)胞核的分離是研究基因表達(dá)及細(xì)胞核形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要步驟。不同組織來(lái)源的細(xì)胞經(jīng)勻漿后，可用分級(jí)離心等方法將細(xì)胞核進(jìn)行分離純化。
 

　　細(xì)胞核的分離目前較常采用以蔗糖為介質(zhì)的差速離心法，可分為細(xì)胞核分離和純化兩大步驟。細(xì)胞勻漿后，先以0.25mol/L。的蔗糖1000g離心洗滌，然后在0.34mol/L和0.88mol/L的蔗糖梯度中1500g離心15-20分鐘，沉淀即為純化的細(xì)胞核。現(xiàn)在細(xì)胞核的提取試劑已商業(yè)化生產(chǎn)，試劑盒說(shuō)明書(shū)中會(huì)提供詳細(xì)的操作步驟。細(xì)胞核被分離后，可經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色在光學(xué)顯微鏡下觀察，或直接在電子顯微鏡下觀察核內(nèi)染色質(zhì)的分布情況。
 

　　此外，在細(xì)胞增殖的研究中，人們常常將Brdu/Edu等底物摻入到增殖的細(xì)胞核DNA鏈中，再通過(guò)熒光素標(biāo)記Brdu/Edu，繼而顯色增殖細(xì)胞的細(xì)胞核。在細(xì)胞凋亡研究中，人們常采用TUNEL染色標(biāo)記凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核。
 

　　由于三維重建等優(yōu)點(diǎn)，共聚焦顯微鏡在細(xì)胞成像技術(shù)中的地位逐漸突出。DAPI雖然常用，但是多數(shù)共聚焦顯微鏡沒(méi)有紫外線(xiàn)波段的激發(fā)光，所以其他一系列更適用于共聚焦的核酸熒光染料被開(kāi)發(fā)出來(lái)，比如TOTO系列等等。

>> 返回首頁(yè)