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當前位置：首頁 > 技術文章 > 慢病毒整合位點標準品強勢來襲

慢病毒整合位點標準品強勢來襲

原載自：www.sunmattes.com[技術資料頻道]  2024-11-11  瀏覽次數：1885

 

嵌合抗原受體T細胞（Chimeric antigen receptor Tcell, CAR-T）免疫療法是將應用基因修飾技術制備表達，嵌合抗原受體(Chimeric antigen receptor, CAR)的T淋巴細胞，經體外擴增后再回輸至患者體內的一種個體化治療方法。
 
近年來，隨著Kymriah,  Yescarta 以及 Strimvelis等細胞治療產品陸續推上市場，慢病毒作為細胞裝載CAR過程的關鍵中間載體，確保慢病毒為基礎的藥物質量和安全性挑戰巨大。去年年底FDA公布調查CAR-T療法的安全性問題—T細胞癌癥風險的出現被認為源于其使用的基因遞送載體-慢病毒載體后，于今年1月31日正式發布“ Considerations for the development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products"指導原則。當中建議根據風險評估來確定載體拷貝數（VCN）的放行標準。風險評估包括插入位點分析、克隆優勢、劑量、適應癥、研究人群等研究支持的實驗數據。國家藥品監督管理局藥品審批中心（CDE）發布的《基因修飾細胞治療產品非臨床研究與技術指導原則》也將“插入突變風險評估"作為非臨床安全性研究的內容，并詳細規定關鍵風險因素的評估要點，因此CAR-T治療需要評估潛在的插入突變風險和致癌性風險。
 

 

慢病毒整合位點檢測方法

 

 
 
目前檢測慢病毒整合位點的主要平臺為高深度測序（NGS)。
 
表格整理_Sheet1.png
Table 1. 常見慢病毒整合位點檢測方法比較
 
綜合考慮，科佰選擇多種方法（捕獲探針法測序+ sanger + ddPCR）驗證，充分驗證標準品的準確性。在驗證過程中，捕獲探針法測序技術針對慢病毒整合位點檢測的準確性得到了很好的驗證。
 
 

慢病毒整合位點標準品

我國在2021年連續出臺了4部基因治療相關產品的指導原則都指出慢病毒整合檢測至少要包含1. 整合方向 2. 整合位置 3. 特定整合位置和整合方向的絕對克隆數目。
 
針對這一要求，科佰現推出慢病毒整合位點標準品。

 

表格整理_Sheet2(3).png

 
部分產品數據展示：
 

圖片1.png

Fig 1. Results of CBPL0002 by NGS (Probe capture method).
 
通過NGS（捕獲探針法測序）技術，結合生信分析方法，選取1000×以上Reads數的基因進行Sanger以及ddPCR法驗證，同時采用ddPCR方法檢測整合頻率。多種方法相結合，準確定位慢病毒插入位點以及整合頻率。
 

圖片2.png

圖片3.png

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圖片5.png

圖片6.png

圖片7.png

 
Fig 2.Results of CBPL0002 by Sanger sequencing.
 

DdPCR.png

 

Fig 3.Results of CBPL0002 by ddPCR.

 
根據NGS（捕獲探針法測序）結果確定慢病毒插入位點，通過Sanger測序以及ddPCR法再次驗證，準確定位慢病毒插入位點以及整合頻率。
 
CAR-T細胞療法被認為是最有前途的癌癥治療方法之一，其在血液系統瘤中的運用已取得了優異的療效，可靠的檢測方法可以準確有效分析慢病毒插入位點，協助客戶評估插入突變的可能性以及相關的風險，提高細胞免疫治療的安全性。
 

慢病毒整合位點檢測服務

 
科佰現推出針對慢病毒整合位點檢測服務（捕獲探針法測序技術）。捕獲探針法測序技術主要是針對LTR區域做探針捕獲，PCR后，NGS測序驗證，結合生信分析方法，判斷慢病毒插入位點。后續同時采用了sanger以及ddPCR方法對NGS(捕獲探針法測序)技術進行了驗證，NGS(捕獲探針法測序)檢測出的位點，sanger以及ddPCR方法均檢出。

表格整理_Sheet3.png

慢病毒插入位點檢測服務（捕獲探針法測序）可以協助您準確定位慢病毒插入位點，慢病毒整合位點標準品不僅可以適用于多種檢測方法，協助您判斷方法的準確性，還可以用于定位檢測方法的檢測限。

 

科佰生物

科佰生物推出慢病毒整合位點標準品以及慢病毒插入位點檢測服務（捕獲探針法測序）。“產品+技術服務"，總有一款適合你！

 

 

 

 

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